在亲子鉴定的实验室流程中,DNA提取之后、STR复合扩增之前,需要先对样本中的DNA进行定量。为提升检材DNA定量的准确性与检测通量,北京天平司法鉴定中心引进了Applied Biosystems QuantStudio 5实时荧光定量PCR(Real-Time PCR,qPCR)系统。本文说明该设备在鉴定中的作用,以及它与数字PCR的区别。
2026年4月,本中心正式引进QuantStudio 5实时荧光定量PCR系统,用于法医物证检材的DNA定量。该系统由赛默飞世尔科技旗下Applied Biosystems品牌生产,是法医物证实验室常用的DNA定量平台之一。
从血样、口腔拭子、带毛囊毛发等样本中提取DNA后,需要先测定DNA的浓度和质量,再据此确定STR复合扩增的模板加入量。STR分型对模板量有一定要求:模板量过多,可能出现峰形异常、非特异性峰、峰高失衡;模板量过少,则可能出现等位基因丢失、峰信号不足、分型不完整。
因此,DNA定量虽然不直接给出鉴定结论,却是保证后续STR分型准确、结果可重复的重要环节。先定量、再按需调整模板量,有助于减少重复实验和分型偏差。
实时荧光定量PCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号实时监测反应进程,结合标准曲线或内参对样本中的核酸进行定量。QuantStudio 5的主要特点包括:
准确的DNA定量,使每一份样本都能在合适的模板量下进行STR扩增,降低因模板量不当导致的等位基因丢失或峰形异常概率,有助于提高亲子鉴定结果的稳定性和重复性。对于微量、降解或质量较差的检材,定量结果还能帮助鉴定人判断是否需要重新提取、纯化或调整检测策略。
| 对比项 | 实时荧光定量PCR(qPCR) | 数字PCR(dPCR) |
|---|---|---|
| 定量方式 | 实时监测荧光,结合Ct值与标准曲线定量 | 将反应分为大量微单元,终点计数 |
| 是否需要标准曲线 | 绝对定量通常需要 | 不需要,可直接给出拷贝数 |
| 常见用途 | DNA定量、基因表达、病原体检测 | 低拷贝绝对定量、稀有突变检测 |
| 本中心QuantStudio 5 | 属于qPCR | 不属于dPCR |
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